核酸检测试剂使用培训方案

1. 核酸检测步骤

核酸检测目前都是取咽拭子的方法（病毒感染口腔粘膜上皮后会寄宿于口腔粘膜上皮，通过采咽拭子达到取样目的），1 小时内送到专门检测室内进行。这个性质决定不可能每个患者想做就能立马做，比如大半夜来的患者就做不了，只能等待第二天仪器开机。

取咽拭子是一个高危的操作。据目前临床研究来看，新型冠状病毒感染肺炎的传播途径有三种，直接传播、气溶胶传播、接触传播。其中飞沫混合在空气中，形成气溶胶，吸入后导致感染。所以对于取样的人员而言，有被感染的风险。

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核酸检测的“假阳性”是指患者本来没感染新冠病毒，但核酸检测出现阳性结果。此“假阳性”的出现通常是由于实验室检测过程中标本间的交叉污染或实验室核酸污染造成的。在技术层面上讲，只要实验室严格落实质控工作，可有效避免“假阳性”的产生。

核酸检测的“假阴性”是指从患者的临床症状、肺部影像学结果甚至流行病学史都支持为新冠肺炎，但患者病毒核酸检测结果为“阴性”，检测结果与临床不符。

2. 核酸检测注意事项

在核酸检测前两小时，请勿进食，为避免影响检测结果，采样前30分钟请勿吸烟、喝版酒和嚼口香糖；为降低交权叉感染风险，所有检测者需配戴口罩并备一个用，在采样结束后进行替换。

在采集鼻咽拭子前检测者应告知采集人员是否存在鼻中隔弯曲或有鼻腔手术史，过程中可能出现鼻部酸痒感，刺激打喷嚏，请立即用纸巾或手肘遮挡。采样时人与人之间请保持一米以上距离。

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对于新型冠状病毒的核酸检测，首先根据试剂盒说明书”样本要求“部分进行样本采集，常规的样本类型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等。

获得患者样本后，需尽快进行检测，如无法立即检测需要转运的样本，应按照说明书的要求进行低温封装，并送到专门的检测机构进行检测。检测机构收到样本后，对样本进行核酸提取，核酸提取试剂应使用批准产品说明书中指定的核酸提取试剂盒。

病毒RNA需要首先逆转录为cDNA，再进行扩增检测。PCR扩增和检测应使用批准产品说明书中指定的荧光定量PCR仪，通过荧光定量PCR所得到的样本Ct值的大小，可以判断患者样本中是否含有新型冠状病毒。

3. 核酸纯化试剂的使用方法和注意事项有哪些

使用方法因厂家不同而不同，下面是一氪生物技术的核酸纯化试剂使用方法及注意事项，供参考：

步骤一：使用无水乙醇与纯化水配制70%乙醇备用。
步骤二：从2-8℃冰箱中取出磁珠悬浮液，在室温条件下震荡混匀，平衡30min。
步骤三：将充分震荡混匀平衡后的磁珠加入待纯化酶反应或PCR反应产物溶液中。磁珠加入体积分别参考图1和图2，若待纯化产物体积不足，可用纯化水或10mM Tris-HCl（pH8.0）补充至相应体积。
步骤四：用移液器反复吹打10次，将磁珠悬浮液和PCR产物或者酶反应物充分混匀，室温条件下静置5min。
步骤五：将反应板放置在磁力架上，静置2min，待溶液澄清后将上清吸走，转入废液桶内。
步骤六：向反应板中加入200μL新鲜配置的70%的乙醇，室温静置30s。静置结束后将乙醇吸走，转入废液桶内。操作环节不可将反应板从磁力分离架上拿下或将磁珠吹散。
步骤七：重复步骤六。
步骤八：保持反应板置于磁力架上状态，室温开盖晾干2min以去除残存的乙醇。
步骤九：将反应板从磁力架上取下来，加入50μL洗脱液，移液器反复吹打10次混匀，室温静置3min。洗脱液加入量根据实际需要而定，但应不少于5μL。
步骤十：将反应板重新放置在磁力架上，室温静置1min，上清液即纯化后的DNA产物。
步骤十一：将上清液转入新的反应管或者反应板中，供下一步反应或检测使用。

4. 核酸检测培训内容

核酸检测培训内容，请参考新冠肺炎防治指南第七版，那上面介绍的非常全面。

5. 核酸检测流程

1、首先，医务人员会使用抄咽拭子擦拭受检者鼻腔或者喉咙扁桃体处，采集唾液分泌物，这个过程其实蛮疼的。

6. 核酸检测要注意什么

核酸检测要注意的是：

1、为避免出现呕吐情况，采样前2小时请勿进食；

2、为避免影响检测结果，采样前30分钟请勿吸烟、喝酒和嚼口香糖；

3、为降低到院交叉感染风险，所有到院检测者需戴口罩和准备一个备用口罩；

4、所有等候检测人员一定要保持1米以上距离，避免交谈；

5、采样、取报告时需携带患者身份证及收据，人证合一。

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新型冠状病毒的核酸检测流程：

对于新型冠状病毒的核酸检测，首先根据试剂盒说明书”样本要求“部分进行样本采集，常规的样本类型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等。

获得患者样本后，需尽快进行检测，如无法立即检测需要转运的样本，应按照说明书的要求进行低温封装，并送到专门的检测机构进行检测。检测机构收到样本后，对样本进行核酸提取，核酸提取试剂应使用批准产品说明书中指定的核酸提取试剂盒。

病毒RNA需要首先逆转录为cDNA，再进行扩增检测。PCR扩增和检测应使用批准产品说明书中指定的荧光定量PCR仪，通过荧光定量PCR所得到的样本Ct值的大小，可以判断患者样本中是否含有新型冠状病毒。

上述过程中样本的采集、保存、转运，样本核酸的提取和检测、结果的判读均须严格按照试剂盒说明书要求进行。

7. 核酸检测具体步骤

1、核酸提取使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应置于-20℃保存，RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存。

2、逆转录合成cDNA。逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。

3、PCR扩增反应PCR反应需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶、缓冲液、和适量无RNA/DNA酶超纯水、以及模板。在扩增仪中，按照设定的程序进行扩增。使用二次扩增的套式PCR扩增方法。

4、扩增产物定性分析；扩增产物常用分析方法是琼脂糖凝胶电泳法，与分子量标准比较，判断扩增片段是否在预期的分子量范围内。其它扩增产物分析方法还有限制性内切酶酶切分析、特异性探针杂交分析以及DNA序列分析等。

5、结果判定和完成报告单：每一次检测需同时做两个阳性对照、两个阴性对照，只有阳性对照扩增出预期的片段、阴性对照没有扩增出任何片段、双份平行样品结果一致的情况下实验才成立，可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定。

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检测新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR。因PCR反应模板仅为DNA，因此在进行PCR反应前，应将新型冠状病毒核酸逆转录为DNA。在PCR反应体系中，

包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；

如反应体系存在靶序列，PCR反应时探针与模板结合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解，报告基团与淬灭基团分离，发出荧光。

每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数与病毒核酸浓度有关，病毒核酸浓度越高， Ct值越小。不同生产企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值。

8. 核酸检测的方法

核酸检测主要是鼻拭子或咽拭子法，经由鼻孔或口腔插入取得上呼吸道分回泌物标本后送答实验室检测。核酸检测主要是指目前对于新型冠状病毒肺炎的一种确诊的实验手段，核酸检测一般分为鼻拭子、咽拭子或者肺泡灌洗液以及痰液，通过呼吸道的标本，我们在实验室里可以检测2019新型冠状病毒的核酸，从而作为临床诊断的一个重要的依据。那临床上目前最常采用的检测方法是鼻拭子或者是咽拭子，操作的时候由医护人员采用特制的长柄取样的棉签，经由鼻孔或者经由口腔插入到鼻腔及咽腔中，在咽喉壁或者鼻腔的粘膜上进行涂抹，取得上呼吸道分泌物标本，这个标本取出之后再送到实验室进行相关的核酸检测。在做的过程中患者不用紧张，可能会有一些轻微的不适例如恶心，相信配合好医护人员的话，能够很快完成这个检查，不会给您带来很大的影响。

9. 核酸检测方法

对于新型冠状病毒的核酸检测，首先根据试剂盒说明书”样本要求“部分进行样本采集，常规的样本类型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等。

获得患者样本后，需尽快进行检测，如无法立即检测需要转运的样本，应按照说明书的要求进行低温封装，并送到专门的检测机构进行检测。检测机构收到样本后，对样本进行核酸提取，核酸提取试剂应使用批准产品说明书中指定的核酸提取试剂盒。

病毒RNA需要首先逆转录为cDNA，再进行扩增检测。PCR扩增和检测应使用批准产品说明书中指定的荧光定量PCR仪，通过荧光定量PCR所得到的样本Ct值的大小，可以判断患者样本中是否含有新型冠状病毒。

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核酸检测原理

所有生物除朊病毒外都含有核酸，核酸包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），新型冠状病毒是一种仅含有RNA的病毒，病毒中特异性RNA序列是区分该病毒与其它病原体的标志物。新型冠状病毒出现后，我国科学家在极短的时间里完成了对新型冠状病毒全基因组序列的解析。

并通过与其它物种的基因组序列对比，发现了新型冠状病毒中的特异核酸序列。临床实验检测过程中，如果能在患者样本中检测到新型冠状病毒的特异核酸序列，应提示该患者可能被新型冠状病毒感染

10. 核酸检测应该注意事项

一、核酸检测流程：
（1）发热门诊患者：可在发热门诊进行核酸采集，检测结果一般在发热门诊领取。
（2）入院患者或自愿接受核酸检测人员：挂号后在各专科门诊开具相关检测单，缴费后按照指示牌到“核酸采集门诊”进行采样，检测结果可到门诊自助机打印领取。
（3）急诊需要住院的患者：急诊就诊的危急重症在急诊科进行核酸采集，采集后到相应科室住院，检测结果在门诊自助机打印领取。
二、核酸检测怎么做？
新型冠状病毒的核酸检测取样方法很简单，只要“轻轻一抹”。到了发热门诊或者是相应的检查室，工作人员会让患者张开嘴，用一个像棉签一样的拭子去擦拭扁桃体和咽隐窝附近的分泌物，也可以通过鼻腔取鼻咽后部的分泌物，然后放到试管里面，再交给检验科去做相应的病毒核酸的检查。

三、核酸检测的注意事项
（1）采样前请清水漱口，2小时内避免进食。
（2）采样前30分钟请勿吸烟、勿喝酒、勿嚼口香糖等。
（3）来医院体检时，请尽量选择非公共交通工具。
（4）进入采样场地前，请配合工作人员进行体温检测及流行病学调查。
（5）被检测者必须佩戴口罩，同时准备一个备用口罩。
（6）所有等候检测人员一定要保持1米以上距离，避免交谈。
（7）采集完毕后立即洗手或使用速干手消毒剂擦拭双手，戴上备用口罩。