核酸檢測試劑使用培訓方案

1. 核酸檢測步驟

核酸檢測目前都是取咽拭子的方法（病毒感染口腔粘膜上皮後會寄宿於口腔粘膜上皮，通過采咽拭子達到取樣目的），1 小時內送到專門檢測室內進行。這個性質決定不可能每個患者想做就能立馬做，比如大半夜來的患者就做不了，只能等待第二天儀器開機。

取咽拭子是一個高危的操作。據目前臨床研究來看，新型冠狀病毒感染肺炎的傳播途徑有三種，直接傳播、氣溶膠傳播、接觸傳播。其中飛沫混合在空氣中，形成氣溶膠，吸入後導致感染。所以對於取樣的人員而言，有被感染的風險。

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核酸檢測的「假陽性」是指患者本來沒感染新冠病毒，但核酸檢測出現陽性結果。此「假陽性」的出現通常是由於實驗室檢測過程中標本間的交叉污染或實驗室核酸污染造成的。在技術層面上講，只要實驗室嚴格落實質控工作，可有效避免「假陽性」的產生。

核酸檢測的「假陰性」是指從患者的臨床症狀、肺部影像學結果甚至流行病學史都支持為新冠肺炎，但患者病毒核酸檢測結果為「陰性」，檢測結果與臨床不符。

2. 核酸檢測注意事項

在核酸檢測前兩小時，請勿進食，為避免影響檢測結果，采樣前30分鍾請勿吸煙、喝版酒和嚼口香糖；為降低交權叉感染風險，所有檢測者需配戴口罩並備一個用，在采樣結束後進行替換。

在採集鼻咽拭子前檢測者應告知採集人員是否存在鼻中隔彎曲或有鼻腔手術史，過程中可能出現鼻部酸癢感，刺激打噴嚏，請立即用紙巾或手肘遮擋。采樣時人與人之間請保持一米以上距離。

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對於新型冠狀病毒的核酸檢測，首先根據試劑盒說明書」樣本要求「部分進行樣本採集，常規的樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。

獲得患者樣本後，需盡快進行檢測，如無法立即檢測需要轉運的樣本，應按照說明書的要求進行低溫封裝，並送到專門的檢測機構進行檢測。檢測機構收到樣本後，對樣本進行核酸提取，核酸提取試劑應使用批准產品說明書中指定的核酸提取試劑盒。

病毒RNA需要首先逆轉錄為cDNA，再進行擴增檢測。PCR擴增和檢測應使用批准產品說明書中指定的熒光定量PCR儀，通過熒光定量PCR所得到的樣本Ct值的大小，可以判斷患者樣本中是否含有新型冠狀病毒。

3. 核酸純化試劑的使用方法和注意事項有哪些

使用方法因廠家不同而不同，下面是一氪生物技術的核酸純化試劑使用方法及注意事項，供參考：

步驟一：使用無水乙醇與純化水配製70%乙醇備用。
步驟二：從2-8℃冰箱中取出磁珠懸浮液，在室溫條件下震盪混勻，平衡30min。
步驟三：將充分震盪混勻平衡後的磁珠加入待純化酶反應或PCR反應產物溶液中。磁珠加入體積分別參考圖1和圖2，若待純化產物體積不足，可用純化水或10mM Tris-HCl（pH8.0）補充至相應體積。
步驟四：用移液器反復吹打10次，將磁珠懸浮液和PCR產物或者酶反應物充分混勻，室溫條件下靜置5min。
步驟五：將反應板放置在磁力架上，靜置2min，待溶液澄清後將上清吸走，轉入廢液桶內。
步驟六：向反應板中加入200μL新鮮配置的70%的乙醇，室溫靜置30s。靜置結束後將乙醇吸走，轉入廢液桶內。操作環節不可將反應板從磁力分離架上拿下或將磁珠吹散。
步驟七：重復步驟六。
步驟八：保持反應板置於磁力架上狀態，室溫開蓋晾乾2min以去除殘存的乙醇。
步驟九：將反應板從磁力架上取下來，加入50μL洗脫液，移液器反復吹打10次混勻，室溫靜置3min。洗脫液加入量根據實際需要而定，但應不少於5μL。
步驟十：將反應板重新放置在磁力架上，室溫靜置1min，上清液即純化後的DNA產物。
步驟十一：將上清液轉入新的反應管或者反應板中，供下一步反應或檢測使用。

4. 核酸檢測培訓內容

核酸檢測培訓內容，請參考新冠肺炎防治指南第七版，那上面介紹的非常全面。

5. 核酸檢測流程

1、首先，醫務人員會使用抄咽拭子擦拭受檢者鼻腔或者喉嚨扁桃體處，採集唾液分泌物，這個過程其實蠻疼的。

6. 核酸檢測要注意什麼

核酸檢測要注意的是：

1、為避免出現嘔吐情況，采樣前2小時請勿進食；

2、為避免影響檢測結果，采樣前30分鍾請勿吸煙、喝酒和嚼口香糖；

3、為降低到院交叉感染風險，所有到院檢測者需戴口罩和准備一個備用口罩；

4、所有等候檢測人員一定要保持1米以上距離，避免交談；

5、采樣、取報告時需攜帶患者身份證及收據，人證合一。

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新型冠狀病毒的核酸檢測流程：

對於新型冠狀病毒的核酸檢測，首先根據試劑盒說明書」樣本要求「部分進行樣本採集，常規的樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。

獲得患者樣本後，需盡快進行檢測，如無法立即檢測需要轉運的樣本，應按照說明書的要求進行低溫封裝，並送到專門的檢測機構進行檢測。檢測機構收到樣本後，對樣本進行核酸提取，核酸提取試劑應使用批准產品說明書中指定的核酸提取試劑盒。

病毒RNA需要首先逆轉錄為cDNA，再進行擴增檢測。PCR擴增和檢測應使用批准產品說明書中指定的熒光定量PCR儀，通過熒光定量PCR所得到的樣本Ct值的大小，可以判斷患者樣本中是否含有新型冠狀病毒。

上述過程中樣本的採集、保存、轉運，樣本核酸的提取和檢測、結果的判讀均須嚴格按照試劑盒說明書要求進行。

7. 核酸檢測具體步驟

1、核酸提取使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設備並按說明書操作。提取RNA時應注意防止RNA降解。DNA應置於-20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應置於-80℃保存。

2、逆轉錄合成cDNA。逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。

3、PCR擴增反應PCR反應需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板。在擴增儀中，按照設定的程序進行擴增。使用二次擴增的套式PCR擴增方法。

4、擴增產物定性分析；擴增產物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標准比較，判斷擴增片段是否在預期的分子量范圍內。其它擴增產物分析方法還有限制性內切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。

5、結果判定和完成報告單：每一次檢測需同時做兩個陽性對照、兩個陰性對照，只有陽性對照擴增出預期的片段、陰性對照沒有擴增出任何片段、雙份平行樣品結果一致的情況下實驗才成立，可以作出核酸陽性或陰性反應結果的判定。

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檢測新型冠狀病毒特異序列的方法最常見的是熒光定量PCR。因PCR反應模板僅為DNA，因此在進行PCR反應前，應將新型冠狀病毒核酸逆轉錄為DNA。在PCR反應體系中，

包含一對特異性引物以及一個Taqman探針，該探針為一段特異性寡核苷酸序列，兩端分別標記了報告熒光基團和淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；

如反應體系存在靶序列，PCR反應時探針與模板結合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性將探針酶切降解，報告基團與淬滅基團分離，發出熒光。

每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子產生。熒光定量PCR儀能夠監測出熒光到達預先設定閾值的循環數與病毒核酸濃度有關，病毒核酸濃度越高， Ct值越小。不同生產企業的產品會依據自身產品的性能確定本產品的陽性判斷值。

8. 核酸檢測的方法

核酸檢測主要是鼻拭子或咽拭子法，經由鼻孔或口腔插入取得上呼吸道分回泌物標本後送答實驗室檢測。核酸檢測主要是指目前對於新型冠狀病毒肺炎的一種確診的實驗手段，核酸檢測一般分為鼻拭子、咽拭子或者肺泡灌洗液以及痰液，通過呼吸道的標本，我們在實驗室里可以檢測2019新型冠狀病毒的核酸，從而作為臨床診斷的一個重要的依據。那臨床上目前最常採用的檢測方法是鼻拭子或者是咽拭子，操作的時候由醫護人員採用特製的長柄取樣的棉簽，經由鼻孔或者經由口腔插入到鼻腔及咽腔中，在咽喉壁或者鼻腔的粘膜上進行塗抹，取得上呼吸道分泌物標本，這個標本取出之後再送到實驗室進行相關的核酸檢測。在做的過程中患者不用緊張，可能會有一些輕微的不適例如惡心，相信配合好醫護人員的話，能夠很快完成這個檢查，不會給您帶來很大的影響。

9. 核酸檢測方法

對於新型冠狀病毒的核酸檢測，首先根據試劑盒說明書」樣本要求「部分進行樣本採集，常規的樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。

獲得患者樣本後，需盡快進行檢測，如無法立即檢測需要轉運的樣本，應按照說明書的要求進行低溫封裝，並送到專門的檢測機構進行檢測。檢測機構收到樣本後，對樣本進行核酸提取，核酸提取試劑應使用批准產品說明書中指定的核酸提取試劑盒。

病毒RNA需要首先逆轉錄為cDNA，再進行擴增檢測。PCR擴增和檢測應使用批准產品說明書中指定的熒光定量PCR儀，通過熒光定量PCR所得到的樣本Ct值的大小，可以判斷患者樣本中是否含有新型冠狀病毒。

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核酸檢測原理

所有生物除朊病毒外都含有核酸，核酸包括脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），新型冠狀病毒是一種僅含有RNA的病毒，病毒中特異性RNA序列是區分該病毒與其它病原體的標志物。新型冠狀病毒出現後，我國科學家在極短的時間里完成了對新型冠狀病毒全基因組序列的解析。

並通過與其它物種的基因組序列對比，發現了新型冠狀病毒中的特異核酸序列。臨床實驗檢測過程中，如果能在患者樣本中檢測到新型冠狀病毒的特異核酸序列，應提示該患者可能被新型冠狀病毒感染

10. 核酸檢測應該注意事項

一、核酸檢測流程：
（1）發熱門診患者：可在發熱門診進行核酸採集，檢測結果一般在發熱門診領取。
（2）入院患者或自願接受核酸檢測人員：掛號後在各專科門診開具相關檢測單，繳費後按照指示牌到「核酸採集門診」進行采樣，檢測結果可到門診自助機列印領取。
（3）急診需要住院的患者：急診就診的危急重症在急診科進行核酸採集，採集後到相應科室住院，檢測結果在門診自助機列印領取。
二、核酸檢測怎麼做？
新型冠狀病毒的核酸檢測取樣方法很簡單，只要「輕輕一抹」。到了發熱門診或者是相應的檢查室，工作人員會讓患者張開嘴，用一個像棉簽一樣的拭子去擦拭扁桃體和咽隱窩附近的分泌物，也可以通過鼻腔取鼻咽後部的分泌物，然後放到試管裡面，再交給檢驗科去做相應的病毒核酸的檢查。

三、核酸檢測的注意事項
（1）采樣前請清水漱口，2小時內避免進食。
（2）采樣前30分鍾請勿吸煙、勿喝酒、勿嚼口香糖等。
（3）來醫院體檢時，請盡量選擇非公共交通工具。
（4）進入采樣場地前，請配合工作人員進行體溫檢測及流行病學調查。
（5）被檢測者必須佩戴口罩，同時准備一個備用口罩。
（6）所有等候檢測人員一定要保持1米以上距離，避免交談。
（7）採集完畢後立即洗手或使用速干手消毒劑擦拭雙手，戴上備用口罩。